厭氧菌檢測儀的正常檢測范圍，就是它在什么條件下能給出準(zhǔn)數(shù)、不會報(bào)錯(cuò)。下面把實(shí)驗(yàn)室常用的三種檢測方式——氣體壓力法、熒光法和ATP生物發(fā)光法——分別說明。

　　一、氣體壓力法

　　1.原理：把樣品放進(jìn)密封瓶，厭氧菌生長消耗氧氣、產(chǎn)生CO?或H?，瓶內(nèi)氣壓變化由傳感器記錄。

　　2.正常范圍：

　　瓶內(nèi)初始氧氣≤0.1%，可用N?或CO?置換。

　　溫度35±1℃，低于30℃或高于40℃會延遲生長。

　　接種量10?—10?CFU/mL；太少無信號，太多氣壓瞬間升高，軟件判為“異常”。

　　檢測時(shí)間一般24—72小時(shí)，超過96小時(shí)仍未變化視為陰性。

　　3.注意：瓶塞必須耐壓，漏氣會導(dǎo)致氣壓曲線平直，儀器報(bào)“無生長”。

　　二、熒光法

　　1.原理：探針只在無氧環(huán)境下發(fā)光，氧濃度越高熒光越弱。

　　2.正常范圍：

　　氧濃度0—50 ppm，超過100 ppm熒光信號基線抬高，結(jié)果不可靠。

　　溫度25—37℃，溫差±2℃內(nèi)讀數(shù)變化＜5%。

　　樣品濁度＜100 NTU，太渾會吸光，出現(xiàn)假陰性。

　　pH 6.5—7.5，偏酸或偏堿都會讓探針猝滅。

　　3.日常校準(zhǔn)：用無氧水（加亞硫酸鈉）做零點(diǎn)，空氣飽和水做100%氧點(diǎn)，每兩周一次。

　　三、ATP生物發(fā)光法

　　1.原理：裂解厭氧菌后釋放ATP，與熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生光，光強(qiáng)和菌量成正比。

　　2.正常范圍：

　　菌量10²—10?CFU/mL；低于10²需濃縮，高于10?需稀釋，否則光強(qiáng)超出檢測器線性。

　　反應(yīng)溫度22—28℃，試劑盒內(nèi)酶對溫度敏感，超過30℃活性下降一半。

　　檢測時(shí)間10分鐘，延遲會導(dǎo)致ATP降解，數(shù)值偏低。

　　背景光＜100 RLU，實(shí)驗(yàn)室燈光或試管劃痕都會抬高背景，需在暗室操作。

　　四、干擾因素

　　1.殘留消毒劑：含氯或季銨鹽會抑制生長，采樣前用無菌水或磷酸鹽緩沖液沖洗。

　　2.抗生素：若樣品來自治療中的病人，需加入β-內(nèi)酰胺酶或樹脂中和。

　　3.氣體比例：CO?濃度＞20%會抑制某些厭氧菌，需用混合氣（80%N?、10%H?、10%CO?）校準(zhǔn)。

　　五、質(zhì)控做法

　　每天做陽性對照（已知厭氧菌株）和陰性對照（無菌培養(yǎng)基）。

　　陽性應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)報(bào)警，陰性全程無信號，偏差＞±10%即停用并檢修。

　　氣體壓力法適合長時(shí)間培養(yǎng)，熒光法適合實(shí)時(shí)監(jiān)測無氧環(huán)境，ATP法適合快速計(jì)數(shù)。三種方法各有檢測上限和下限，只要控制溫度、氧氣、接種量和背景干擾，就能保證結(jié)果在正常范圍內(nèi)。